Nacido en Madrid y criado en el cercano Leganés, Florentino Fernández antes de dedicarse a la interpretación fue vigilante de seguridad, hasta que sus amigos le convencieron para que se presentara al casting de "Esta noche cruzamos el Mississippi" de Telecinco. En ese programa y más tarde en "La sonrisa del pelícano", ambos presentados por Pepe Navarro, imitaba a Chiquito de la Calzada creando además a sus clones, Lucas Grijánder y Crispín Klander.
En julio de 1998 y durante cuatro exitosos años, co-presentó junto a Javier Capitán el programa diario "El Informal" donde analizaban en tono ácido la actualidad. Disfrutaron de gran popularidad gracias a sus famosos sketches, vídeos doblados e imitaciones, pasando de ser un espacio de relleno de apenas 20 minutos a encabezar las listas del share.
Con "El Informal", Florentino Fernández recibió el TP de Oro al mejor personaje revelación de 1999 y fue finalista al Mejor Comunicador de Programas de Entretenimiento 1999 por la Academia de las Ciencias y de las Artes de la Televisión en España (ATV).
A su vez comenzó su carrera como doblador en la película "Austin Powers, la espía que me achuchó" donde doblaba al propio Austin, al Dr. Maligno y a Gordo Cabrón.
Ha continuado esta faceta con las películas "Little Nicky", "Austin Powers 3, Goldmember", "Los visitantes en Chicago", "El tesoro de Manitú", "Robots", "Valiant", "El arca de Noé", "Kung Fu Panda", "El reino delos chiflados" y "Hermanos por pelotas".
Sus inicios como actor de series de televisión fueron en la exitosa "Siete vidas" donde interpretaba a Félix, hermano de Paco, (Javier Cámara) e hijo de Sole (Amparo Baró).
En 2003 consiguió su propio programa nocturno como animador-presentador en La 1: "El Show de Flo", con la colaboración de Miguel Nadal, su compañero de "El Informal". Con este programa recibió la Antena de Oro 2002 y el Premio 2003 al Mejor Programa de TV del Festival de Cine de Comedia de Peñíscola.
También destaca en su faceta de monologuista en "El Club de la Comedia" para la televisión o sobre los escenarios con las obras de teatro "5hombres.com" y "4 años y 1 día".
Su paso por el cine ha sido también encuadrado en papeles cómicos, como en "El oro de Moscú", "Una de zombis" y junto a Santiago Segura, tanto en "Isi/Disi, amor a lo bestia" e "Isi/Disi 2, alto voltaje" como haciendo cameos en "Torrente 2" y "Torrente 3".
En 2004 volvería a hacer un programa informativo en clave de humor, en esta ocasión junto a Nuria Roca en "UHF", en las noches de Antena 3. Ya en 2005 presentó y actuó el programa de sketches de TVE 1: Splunge junto a, entre otros, sus ex-compañeros de "El Informal" Patricia Conde y Miguel Nadal.
También trabajó en la Sexta con los programas "Planeta Finito" y "El Club de Flo", en el que, con la ayuda de Agustín Jiménez, Bermúdez, Luisa Martín y Goyo Jiménez, enseñaba a interpretar monólogos de humor a los políticos, periodistas y artistas invitados al programa.
En 2007 fue premiado también con el Micrófono de Oro al Mejor presentador.
Ya fuera de la televisión, desde mediados de 2006 y durante más de dos años, interpretó la obra de teatro "Una pareja de miedo" junto a Josema Yuste, que ahora se traslada a la gran pantalla.
Con Yuste realizó también el especial de Nochebuena de 2008 titulado "Josema y Flo Especial Nochebuena ¿Y ahora qué?". Un programa de humor que incluía las mejores parodias, sketches, imitaciones y doblajes de una pareja que se unía por primera vez en televisión. El éxito que obtuvo motivó que en 2009 se estrenara un nuevo programa semanal con el título "¿Y ahora qué?".